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RPMI 1640培养基以研发地点罗斯韦尔公园纪念研究所（Roswell Park Memorial Institute.RPMI）命名，1640为培养基代号。它是McCoy's 5A培养基的改进型，使用碳酸氢盐缓冲系统。

RPMI 1640培养基最初开发用于人白血病细胞的悬浮或单层培养，后来被发现也适用于多种哺乳动物细胞，包括HeLa、Jurkat、MCF-7、PC-12、PBMC、星形胶质细胞和癌细胞，尤其适用于悬浮细胞的培养，是使用最为广泛的培养基之一。

RPMI 1640培养基与其它培养基的区别在于含有还原型谷胱甘肽和高浓度的维生素。RPMI1640培养基含有EMEM和DMEM中没有的生物素、维生素B12和对氨基苯甲酸，以及高浓度的氯化胆碱和肌醇。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺是一种高级细胞培养添加剂，可直接替代L-谷氨酰胺。L-谷氨酰胺是细胞培养液体环境中所必需的一种营养成分，但其在水溶液中不稳定，易降解产生对细胞有害的氨；而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分稳定，不会自发降解，其被细胞利用的机制为：细胞在培养时会向培养液中释放一种肽酶，将L-丙氨酰-L-谷氨酰胺逐渐水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺，这种将低浓度水平的L-谷氨酰胺逐渐释放到培养液中的过程类似于流加培养策略，可以提高L-谷氨酰胺的利用率，且不会产生多余的氨，更利于细胞的生长。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺可以代替等摩尔的L-谷氨酰胺，适用于所有的细胞，几乎无需适应，并且可以延长细胞的培养时间，减少传代次数，细胞活性降低得更慢。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的添加可能导致延滞期略微延长，其原因是肽酶的释放和二肽的消化需要一定的时间，不影响后续培养。HEPES是一种优良的生物缓冲剂，对细胞无毒性作用，培养基添加HEPES后能够较长时间保持恒定的PH范围，可以有效的防止培养液PH波动较大对细胞生长状态产生的不利影响。